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細(xì)胞系培養(yǎng)技術(shù)是細(xì)胞生物學(xué)研究方法中重要和常用技術(shù)，通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)既可以獲得大量細(xì)胞，又可以借此研究細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞的合成代謝、細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖等。

想成功培養(yǎng)出細(xì)胞系得出想要的結(jié)果，要注意以下事項(xiàng)：

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1、從液氮罐中拿出凍存管時(shí)要做好防護(hù)工作，特別是避免液氮濺到眼睛里，有條件的實(shí)驗(yàn)室可以配備防凍手套和護(hù)目鏡；

2、取出的凍存管要先確認(rèn)管內(nèi)沒有液氮，再放入37度水浴鍋，有液氮的情況下很容易因?yàn)楣軆?nèi)壓強(qiáng)突然增大而導(dǎo)致凍存管炸裂，輕則細(xì)胞無(wú)法使用，重則傷及實(shí)驗(yàn)人員；

3、融化過(guò)程中要不斷輕輕搖晃凍存管，使其盡快融化，但搖晃程度要把握得當(dāng)，不能讓水浴鍋中的水滲進(jìn)凍存管中；

4、離心的具體轉(zhuǎn)速和時(shí)間視細(xì)胞而定，通常難養(yǎng)的細(xì)胞需要降低轉(zhuǎn)速，縮短時(shí)間，以減少離心對(duì)細(xì)胞的傷害；

5、部分對(duì)離心敏感的細(xì)胞（主要是原代細(xì)胞）可以采用融化后不離心，直接重懸后補(bǔ)足培養(yǎng)基培養(yǎng)，待其貼壁后再換液去掉凍存液中DMSO的方式處理；

第六、如果凍存細(xì)胞量不多，可以在凍存管蓋上標(biāo)注離心方向，以便確定離心后細(xì)胞團(tuán)位置，吸去上清時(shí)調(diào)整凍存管角度，使細(xì)胞團(tuán)位于最下方，可以盡量減少細(xì)胞損失。

細(xì)胞污染的預(yù)防

1 實(shí)驗(yàn)用品防止污染。細(xì)胞培養(yǎng)所用試劑、耗材、器材的清洗、各種溶液滅菌要仔細(xì)，并在無(wú)菌實(shí)驗(yàn)檢測(cè)陰性后才能使用。操作室及剩余的無(wú)菌器材要定期清潔、消毒、滅菌。

2 操作過(guò)程防止污染。

3 穿著容易起靜電或吸附灰塵的衣物必須更換為白大褂后才能進(jìn)入細(xì)胞間。

4 實(shí)驗(yàn)開始前需要確定戴的手套沒有問(wèn)題，只要接觸過(guò)生物安全柜之外的物品，必須及時(shí)對(duì)手套進(jìn)行消毒。

5 進(jìn)入細(xì)胞培養(yǎng)間后關(guān)好門，坐下來(lái)盡量少走動(dòng)以免影響生物安全柜的風(fēng)簾。工作開始前要先用75%酒精棉球擦手和瓶蓋。事先要嚴(yán)格檢查所用的器材、溶液和細(xì)胞，不要把污染品或未經(jīng)消毒的物品帶入無(wú)菌室內(nèi)，更不能隨便使用，以免造成大規(guī)模污染。

6 細(xì)胞操作時(shí)動(dòng)作要輕，必須在火焰周圍無(wú)菌區(qū)內(nèi)打開瓶口，并將瓶口放在火焰周圍簡(jiǎn)單轉(zhuǎn)動(dòng)燒灼，注意不要讓火焰把塑料瓶口燒化。

7 實(shí)驗(yàn)操作時(shí)生物安全柜的隔板要盡可能放低，盡量減少談話，打噴嚏或咳嗽時(shí)絕對(duì)不能對(duì)著工作區(qū)，以免造成不必要的污染。

8 瓶蓋應(yīng)當(dāng)?shù)狗旁谶h(yuǎn)離自己的地方，以避免瓶蓋被誤操作所污染。

9 不要從敞開的容器口上方經(jīng)過(guò)，以避免衣服上掉落不明物體對(duì)細(xì)胞的污染。

10 實(shí)驗(yàn)操作時(shí)要注意及時(shí)更換巴斯德吸管、移液槍槍頭和移液管，切勿一根管子做到底。一旦發(fā)現(xiàn)接觸了非潔凈或者無(wú)法確定潔凈的物品必須直接丟棄。實(shí)驗(yàn)完畢應(yīng)及時(shí)收拾，保持實(shí)驗(yàn)室清潔整齊，最后用75%酒精清潔臺(tái)面。

防止細(xì)胞交叉污染

1 在進(jìn)行多種細(xì)胞培養(yǎng)操作時(shí)，所用器具要嚴(yán)格區(qū)分，最好作上標(biāo)記便于辨別。按順序進(jìn)行操作，一次只處理一種細(xì)胞，多種細(xì)胞多種操作一起進(jìn)行時(shí)易發(fā)生t昆亂。

2 在進(jìn)行換液或傳代操作時(shí)，粘有細(xì)胞的移液槍頭和移液管不要觸及試劑瓶瓶口，以免把細(xì)胞帶到培養(yǎng)基中污染其他細(xì)胞。
3 所有細(xì)胞一旦購(gòu)置，或從別處引入，或自己建立，必須及時(shí)保種凍存，一旦發(fā)生污染可重新復(fù)蘇細(xì)胞，繼續(xù)培養(yǎng)。

上海通蔚生物嚴(yán)格按照說(shuō)明書的操作進(jìn)行，細(xì)胞系所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。可從標(biāo)本收集、保存、預(yù)試驗(yàn)、實(shí)驗(yàn)、數(shù)據(jù)分析等全實(shí)驗(yàn)過(guò)程提供完整的技術(shù)指導(dǎo)。